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家蚕核型多角体病毒IE1的多克隆抗体制备及鉴定
作者: 董战旗 [1] ; 张军 [1] ; 胡楠 [1] ; 鲁成 [1,2] ; 潘敏慧 [1,2]
关键词: 家蚕 家蚕核型多角体病毒 IE1 原核表达 多克隆抗体
摘要:家蚕核型多角体病毒(BmNPV)ie1基因是 BmNPV DNA 复制的必需基因,其编码的 IE1蛋白能够反式转录激活杆状病毒早期基因的表达.为了进一步研究 IE1蛋白在家蚕核型多角体病毒感染宿主过程中具体的功能,研究通过 PCR 扩增 BmNPV ie1基因片段,亚克隆到原核表达载体 pET32,获得重组质粒 pET32-IE1,经测序正确后,转化至大肠杆菌 BL21(DE3)表达菌株.通过 IPTG 诱导融合蛋白原核表达后,初步纯化收集抗原,免疫新西兰大白兔,制备 IE1多克隆抗体.应用制备的免疫兔血清进行 Western-blot 分析,结果显示多克隆抗体能特异识别 BmN-PV 的 IE1和 IE0蛋白.免疫荧光结果同样显示 IE1蛋白定位于宿主细胞核病毒复制中心.IE1抗体制备的成功为进一步研究 IE1在病毒感染家蚕中的作用机理奠定了基础.